Gollandiyalik tadqiqotchilar CRISPR va bioluminesansni eksperimental sinovda birlashtiradiyuqumli kasalliklar

Gollandiyalik tadqiqotchilarning fikricha, yangi ishlab chiqilgan tungi oqsil virusli kasalliklar tashxisini tezlashtirishi va soddalashtirishi mumkin.
Chorshanba kuni ACS nashrlarida chop etilgan ularning tadqiqoti yorqin ko'k yoki yashil oqsillar yordamida virusli nuklein kislotalarni va ularning tashqi ko'rinishini tez tahlil qilishning sezgir, bir bosqichli usulini tasvirlaydi.
Nuklein kislota barmoq izlarini aniqlash orqali patogenlarni aniqlash klinik diagnostika, biotibbiyot tadqiqotlari, oziq-ovqat va atrof-muhit xavfsizligi monitoringida asosiy strategiya hisoblanadi.Keng qo'llaniladigan miqdoriy polimeraza zanjiri reaktsiyasi (PCR) testlari juda sezgir, ammo murakkab namuna tayyorlash yoki natijalarni talqin qilishni talab qiladi, bu ularni ba'zi sog'liqni saqlash sozlamalari yoki resurslar cheklangan sozlamalar uchun amaliy bo'lmaydi.
Gollandiyadan kelgan ushbu guruh turli xil sharoitlarda qo'llanilishi mumkin bo'lgan tez, ko'chma va ishlatish uchun qulay nuklein kislota diagnostikasi usulini ishlab chiqish uchun universitetlar va shifoxonalar olimlari o'rtasidagi hamkorlik natijasidir.
Ular o't chirog'i chaqnashlari, gulxan chaqnashlari va suv fitoplanktonining mayda yulduzlaridan ilhomlangan bo'lib, ularning barchasi bioluminesans deb ataladigan hodisa bilan ta'minlangan.Bu qorong'uda porlash effekti lusiferaza oqsili ishtirokidagi kimyoviy reaktsiya tufayli yuzaga keladi.Olimlar nishonni topishda kuzatishni osonlashtirish uchun yorug'lik chiqaradigan sensorlarga lyusiferaza oqsillarini kiritdilar.Bu ushbu sensorlarni tibbiy yordamni aniqlash uchun ideal qilishiga qaramasdan, ular hozirda klinik diagnostika testlari uchun zarur bo'lgan yuqori sezuvchanlikka ega emas.CRISPR genini tahrirlash usuli bu imkoniyatni ta'minlay olsa-da, murakkab, shovqinli namunalarda mavjud bo'lishi mumkin bo'lgan zaif signalni aniqlash uchun ko'p qadamlar va qo'shimcha maxsus uskunalar talab qilinadi.
Tadqiqotchilar CRISPR bilan bog‘liq oqsilni oddiy raqamli kamera yordamida aniqlash mumkin bo‘lgan bioluminesans signal bilan birlashtirish yo‘lini topdilar.Tahlil qilish uchun etarli RNK yoki DNK namunasi mavjudligiga ishonch hosil qilish uchun tadqiqotchilar 100 ° F atrofida doimiy haroratda ishlaydigan oddiy usul bo'lgan rekombinaza polimeraza kuchaytirilishini (RPA) amalga oshirdilar.Ular Luminescent Nuklein Acid Sensor (LUNAS) deb nomlangan yangi platformani ishlab chiqdilar, unda ikkita CRISPR/Cas9 oqsili virus genomining turli qo'shni qismlari uchun xos bo'lib, ularning har biri yuqorida ularga biriktirilgan noyob lusiferaza fragmentiga ega.
Tadqiqotchilar tekshirayotgan o'ziga xos virusli genom mavjud bo'lganda, ikkita CRISPR/Cas9 oqsili maqsadli nuklein kislotalar ketma-ketligiga bog'lanadi;ular bir-biriga yaqin bo'lib, buzilmagan lyusiferaza oqsilining hosil bo'lishiga va kimyoviy substrat ishtirokida ko'k nur chiqarishiga imkon beradi..Ushbu jarayonda iste'mol qilinadigan substratni hisobga olish uchun tadqiqotchilar yashil yorug'lik chiqaradigan nazorat reaktsiyasidan foydalanganlar.Rangni yashildan ko'kka o'zgartiradigan naycha ijobiy natijani ko'rsatadi.
Tadqiqotchilar o'zlarining platformalarini aniqlaydigan RPA-LUNAS tahlilini ishlab chiqish orqali sinab ko'rdilarSARS-CoV-2 RNKzerikarli RNK izolyatsiyasisiz va nazofarengeal tampon namunalarida diagnostika samaradorligini ko'rsatdi.COVID 19bemorlar.RPA-LUNAS SARS-CoV-2 ni RNK virus yuki 200 nusxa/mkl gacha boʻlgan namunalarda 20 daqiqa ichida muvaffaqiyatli aniqladi.
Tadqiqotchilar, ularning tahlili boshqa ko'plab viruslarni oson va samarali aniqlashi mumkinligiga ishonishadi."RPA-LUNAS yuqumli kasalliklarni tekshirish uchun jozibador", deb yozgan ular.